เครื่องสกัดและตรวจจับกรดนิวคลีอิกอัตโนมัติเต็มรูปแบบของนิวเทค

ห้าความแรง:
● เครื่องมือที่กำหนดค่าด้วยการสกัดกรดนิวคลีอิกและขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์
● เครื่องมือที่กำหนดค่าด้วยโมดูลสกัดด้วยอัลตราโซนิก
● เครื่องมือกำหนดค่าด้วยระบบอัตโนมัติเต็มรูปแบบ
● เครื่องมือกำหนดค่าด้วยการขยายอุณหภูมิแบบแปรผัน
● อุปกรณ์ที่กำหนดค่าด้วยชุดรีเอเจนต์ที่ปิดสนิท

1.รีเอเจนต์การตรวจจับกรดนิวคลีอิกจำเป็นต้องสกัดและทำให้บริสุทธิ์หรือไม่
หลักการของการตรวจจับกรดนิวคลีอิกมีดังต่อไปนี้:ภายใต้การกระทำของไพรเมอร์ DNA polymerase จะถูกใช้ในการขยายปฏิกิริยาลูกโซ่บนแม่แบบ DNA/RNA (ต้องมีการถอดรหัสแบบย้อนกลับของ NA) จากนั้นจึงตรวจพบปริมาณของสัญญาณฟลูออเรสเซนต์ที่ปล่อยออกมาเพื่อตรวจสอบ ไม่ว่าตัวอย่างจะมีกรดนิวคลีอิก (DNA/RNA) ของเชื้อโรคที่จะตรวจพบหรือไม่

1)ตัวอย่างที่ไม่ได้รับการสกัดหรือทำให้บริสุทธิ์อาจมีส่วนประกอบหลายอย่างที่ส่งผลต่อผลลัพธ์สุดท้าย: นิวคลีเอส (ซึ่งสามารถละลายกรดนิวคลีอิกเป้าหมายและทำให้เกิดผลลบลวง), โปรตีเอส (ซึ่งสามารถลด DNA โพลีเมอเรสและทำให้เกิดผลลบลวง), โลหะหนัก เกลือ (ซึ่งนำไปสู่การหยุดการทำงานของซินเทสและทำให้เกิดผลบวกลวง), ค่า pH ที่เป็นกรดหรือด่างเกินไป (ซึ่งอาจทำให้ปฏิกิริยาล้มเหลว), RNA ที่ไม่สมบูรณ์ (นำไปสู่ความล้มเหลวในการถอดรหัสย้อนกลับที่เป็นลบลวง)

2) ตัวอย่างบางส่วนขยายโดยตรงได้ยาก: แกรมบวกและปรสิตบางชนิด เนื่องจากผนังเซลล์หนาและโครงสร้างอื่นๆ หากพวกมันไม่ผ่านกระบวนการสกัดกรดนิวคลีอิกและการทำให้บริสุทธิ์ ชุดอุปกรณ์ที่ปราศจากการสกัดอาจล้มเหลวในการดำเนินการดังกล่าว ตัวอย่าง

ดังนั้นจึงขอแนะนำให้เลือกชุดทดสอบหรือเครื่องมือที่กำหนดค่าด้วยขั้นตอนการสกัดกรดนิวคลีอิก

2. การสกัดด้วยสารเคมีหรือการสกัดด้วยคลื่นอัลตราโซนิกทางกายภาพ?
โดยทั่วไปแล้ว การสกัดด้วยสารเคมีสามารถนำไปใช้กับการปรับสภาพและการทำให้บริสุทธิ์ได้เป็นส่วนใหญ่อย่างไรก็ตาม ในแบคทีเรียแกรมบวกที่มีผนังหนาและปรสิตบางชนิด ก็เป็นกรณีที่การสกัดทางเคมีไม่สามารถรับแม่แบบกรดนิวคลีอิกที่มีประสิทธิภาพได้ ซึ่งส่งผลให้เกิดการตรวจจับผลลบที่ผิดพลาดนอกจากนี้ การสกัดด้วยสารเคมีมักจะใช้สารที่มีฤทธิ์รุนแรง หากการชะล้างไม่ทั่วถึง ก็สามารถนำสารอัลคาไลเข้มข้นเข้าสู่ระบบปฏิกิริยาได้ง่าย ส่งผลให้ผลลัพธ์ที่ไม่ถูกต้อง

การกระจายตัวด้วยคลื่นอัลตราโซนิกใช้การบดทางกายภาพ ซึ่ง GeneXpert ซึ่งเป็นองค์กรชั้นนำในด้าน POCT สำหรับการใช้งานของมนุษย์ประสบความสำเร็จแล้ว และมีข้อได้เปรียบอย่างแน่นอนในการสกัดกรดนิวคลีอิกจากตัวอย่างที่ซับซ้อนบางชนิด (เช่น เชื้อ Mycobacterium tuberculosis)

ดังนั้นจึงขอแนะนำให้เลือกชุดทดสอบหรือเครื่องมือที่กำหนดค่าด้วยขั้นตอนการสกัดกรดนิวคลีอิกและจะเหมาะสมที่สุดหากมีโมดูลสกัดด้วยคลื่นอัลตราโซนิก

3. แบบแมนนวลกึ่งอัตโนมัติและอัตโนมัติเต็มรูปแบบ?
ซึ่งเป็นปัญหาด้านต้นทุนแรงงานและประสิทธิภาพในการทำงานปัจจุบันโรงพยาบาลสัตว์เลี้ยงไม่มีบุคลากรเพียงพอ และการสกัดและตรวจหากรดนิวคลีอิกเป็นงานที่ต้องใช้ทักษะและประสบการณ์บางอย่างไม่ต้องสงสัยเลยว่าเครื่องสกัดและตรวจจับกรดนิวคลีอิกอัตโนมัติเต็มรูปแบบคือตัวเลือกที่สมบูรณ์แบบ

4. การขยายอุณหภูมิคงที่หรือการขยายอุณหภูมิแบบแปรผัน?
ปฏิกิริยาการขยายสัญญาณคือจุดเชื่อมต่อการตรวจจับกรดนิวคลีอิก และเทคโนโลยีระดับมืออาชีพที่เกี่ยวข้องกับจุดเชื่อมต่อนี้มีความซับซ้อนพูดโดยคร่าวๆ ก็คือ เอนไซม์ถูกใช้เพื่อขยายกรดนิวคลีอิกในกระบวนการขยายสัญญาณ จะตรวจพบสัญญาณฟลูออเรสเซนซ์ที่ขยายแล้วหรือสัญญาณฟลูออเรสเซนซ์ที่ฝังอยู่โดยทั่วไป ยิ่งสัญญาณฟลูออเรสเซนซ์ปรากฏขึ้นเร็วเท่าไร ปริมาณยีนเป้าหมายของกลุ่มตัวอย่างก็จะยิ่งมากขึ้นเท่านั้น

การขยายอุณหภูมิคงที่คือการขยายกรดนิวคลีอิกที่อุณหภูมิคงที่ ในขณะที่การขยายอุณหภูมิแบบแปรผันเป็นการขยายแบบวงจรอย่างเคร่งครัดตามการขยายสภาพ-การหลอม-การยืดตัวมีการใช้เวลาในการขยายอุณหภูมิคงที่ ในขณะที่เวลาในการขยายอุณหภูมิแบบแปรผันจะได้รับผลกระทบอย่างมากจากอัตราการเพิ่มหรือลดอุณหภูมิของอุปกรณ์ (ปัจจุบัน ผู้ผลิตหลายรายสามารถทำการขยาย 40 รอบในเวลาประมาณ 30 นาที)

หากสภาพห้องปฏิบัติการดีและการแบ่งเขตเข้มงวด ก็สมเหตุสมผลที่จะกล่าวว่าความแตกต่างด้านความแม่นยำระหว่างทั้งสองจะไม่ดีนักอย่างไรก็ตาม การขยายอุณหภูมิแบบแปรผันจะสังเคราะห์ผลิตภัณฑ์กรดนิวคลีอิกได้มากขึ้นในเวลาอันสั้นกว่าสำหรับห้องปฏิบัติการที่ไม่มีการแบ่งเขตที่เข้มงวดและบุคลากรที่ได้รับการฝึกอบรมอย่างมืออาชีพ ความเสี่ยงของการรั่วไหลของละอองกรดนิวคลีอิกจะมีมากขึ้น ผลบวกลวงเกิดขึ้นเมื่อการรั่วไหลเกิดขึ้น และเป็นเรื่องยากอย่างยิ่งที่จะกำจัด

นอกจากนี้ การขยายอุณหภูมิคงที่ยังมีแนวโน้มที่จะเกิดการขยายแบบไม่เฉพาะเจาะจงเมื่อตัวอย่างมีความซับซ้อน (อุณหภูมิปฏิกิริยาสัมพัทธ์ต่ำกว่า และยิ่งอุณหภูมิส่วนขยายสูงเท่าใด ความจำเพาะในการจับไพรเมอร์ก็จะยิ่งดีขึ้น)

ในส่วนของเทคโนโลยีปัจจุบัน การขยายอุณหภูมิแบบแปรผันมีความน่าเชื่อถือมากกว่า

5. จะหลีกเลี่ยงความเสี่ยงต่อการรั่วไหลของผลิตภัณฑ์ขยายกรดนิวคลีอิกได้อย่างไร
ในปัจจุบัน ผู้ผลิตหลายรายเลือกหลอด PCR ชนิดต่อมเป็นหลอดปฏิกิริยากรดนิวคลีอิกซึ่งถูกปิดผนึกด้วยแรงเสียดทาน และการสูญเสียอุณหภูมิในการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิแปรผันในการขยาย PCR อุณหภูมิตัวแปรถึง 90 องศา
เซนติเกรด.กระบวนการขยายตัวด้วยความร้อนและการหดตัวด้วยความเย็นซ้ำๆ ถือเป็นความท้าทายอย่างมากในการปิดผนึกท่อ PCR และท่อ PCR ชนิดต่อมนั้นทำให้เกิดการรั่วไหลได้ง่าย

ควรใช้ปฏิกิริยากับชุด/ท่อที่ปิดสนิทเพื่อหลีกเลี่ยงการรั่วไหลของผลิตภัณฑ์ที่ทำปฏิกิริยาคงจะดีมากถ้ามีชุดอุปกรณ์ที่ปิดสนิทสำหรับการสกัดและตรวจจับกรดนิวคลีอิก

ดังนั้นเครื่องสกัดและตรวจจับกรดนิวคลีอิกอัตโนมัติเต็มรูปแบบใหม่ของ New Tech จึงมีตัวเลือกที่ดีที่สุดห้าตัวเลือกข้างต้น